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同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒的檢測(cè)原理

來源:http://www.cqszjj.com/news1029488.html 發(fā)布時(shí)間:2024/7/18 16:52:00

同型半胱氨酸(HCY)測(cè)定試劑盒的檢測(cè)原理主要基于化學(xué)反應(yīng)來定量測(cè)定血清中同型半胱氨酸的含量。以下是幾種常見的檢測(cè)原理:

1. 酶法

原理概述:酶法通過一系列酶促反應(yīng)將同型半胱氨酸(Hcy)轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的物質(zhì),進(jìn)而測(cè)定其含量。

具體步驟:氧化型Hcy首先被轉(zhuǎn)化成游離Hcy。

游離Hcy在CBS(胱硫醚-β-合成酶)的催化下和絲氨酸反應(yīng)生成L-胱硫醚。

L-胱硫醚在CBL(胱硫醚裂解酶)催化下又生成Hcy、丙酮酸和NH3。

該循環(huán)反應(yīng)生成的丙酮酸可以用乳酸脫氫酶(LDH)和NADH(還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)檢測(cè)到。

NADH轉(zhuǎn)變成NAD+的速率與樣品中Hcy含量成正比,通過檢測(cè)NADH的吸光度變化率來計(jì)算Hcy的含量。

2. 循環(huán)酶法

原理概述:基于小分子捕獲技術(shù)(SMT)的循環(huán)酶法通過一系列酶促反應(yīng)放大檢測(cè)信號(hào),從而精確測(cè)定Hcy含量。

具體步驟:氧化型同型半胱氨酸在TCEP(三乙羧乙基膦)作用下轉(zhuǎn)化為游離型Hcy。

游離型Hcy與共價(jià)底物S-腺苷甲硫氨酸(SAM)催化反應(yīng)形成蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。

SAH被SAH水解酶水解成腺苷和Hcy,形成的Hcy可以循環(huán)加入反應(yīng),從而放大了檢測(cè)信號(hào)。

生成的腺苷立即水解為次黃嘌呤和氨,氨在谷氨酸脫氫酶的作用下使NADH轉(zhuǎn)化為NAD+,樣本中的Hcy濃度與NADH的變化成正比。

3. ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))

原理概述:ELISA法采用雙抗體一步夾心法,通過抗原抗體反應(yīng)和酶促顯色反應(yīng)來測(cè)定Hcy含量。

具體步驟:往預(yù)先包被人同型半胱氨酸(Hcy)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP(辣根過氧化物酶)標(biāo)記的檢測(cè)抗體。

經(jīng)過溫育并徹底洗滌后,用底物TMB(四甲基聯(lián)苯胺)顯色。

TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。

顏色的深淺和樣品中的Hcy呈正相關(guān),用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

注意事項(xiàng)

不同品牌和型號(hào)的試劑盒檢測(cè)原理可能略有差異,具體操作時(shí)應(yīng)參照試劑盒說明書進(jìn)行。

樣本采集和處理應(yīng)嚴(yán)格按照要求執(zhí)行,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

試劑盒應(yīng)存放在適宜的溫度和濕度條件下,避免過期或變質(zhì)影響檢測(cè)結(jié)果。

綜上所述,同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒的檢測(cè)原理多種多樣,但核心都是通過化學(xué)反應(yīng)將Hcy轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的物質(zhì),并通過特定的檢測(cè)方法(如吸光度測(cè)定)來定量測(cè)定其含量。